黄曲霉毒素总量（Aflatoxins Total）ELISA检测试剂盒说明书
产品编号：LD023
一、原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法定量检测样品中黄曲霉毒素的残留量。
二、适用范围
定量检测玉米、花生、饲料、食用油等样品中黄曲霉毒素的残留。
三、试剂盒特点及技术指标
* 检 测 时 间 ： 30 min
试剂盒灵敏度： 0.1 ppb(μg/kg)
* 试剂盒检测纯阴性样本的背景值＜1 ppb
试剂盒检测样本的回收率和准确度：
样本 回收率
花生、饲料 70 %-120 %
玉米、食用油 70 %-120 %
试剂盒特异性：
药物名称 交叉反应率（%）
黄曲霉毒素B2 100 %
黄曲霉毒素B1 80 %
黄曲霉毒素G1 80 %
黄曲霉毒素G2 90 %
四、所需材料
仪器：微孔板酶标仪450 nm/630 nm、旋转蒸发仪/氮气吹干装置、振荡器、离心机、水浴锅、刻度移液管（10 mL）、天平（感量0.01 g）、离心管（5 mL, 50 mL）、漏斗、分液漏斗、烧杯（50mL）、滤纸。
微量移液器：单道 1μL～10 μL、10 μL～100 μL
多道 50 μL～300 μL
试剂：甲醇、石油醚、去离子水。
五、 试剂盒组成
序 组成部分 96T装量
1 黄曲霉毒素酶标板 12×8孔
2 黄曲霉毒素总量标准品浓度*6 6×1 mL
3 黄曲霉总量高浓度标品1 ppm 1mL
4 黄曲霉毒素总量酶标物 13 mL
5 黄曲霉毒素总量抗体 7 mL
6 底物液A液 7 mL
7 底物液B液 7 mL
8 终 止 液 7 mL
9 10×浓缩洗涤液 40 mL
10 2×黄曲霉总量样品稀释液 45 mL
*注：6个标准品浓度为：0 ppb, 0.1 ppb, 0.3 ppb,
0.9 ppb, 2.7 ppb, 8.1 ppb，直接使用。
六、 酶标免疫测定程序
将所需试剂从冷藏环境中取出，待其完全回 升至室温（20～25℃）后方可使用。注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
按标准品和样品双孔平行的数量使用微孔。
加标准品/样品、抗体：加标准品/样品50μL
到对应的微孔中，加入黄曲霉毒素总量酶标物50 μL /孔，再加入黄曲霉毒素总量抗体50μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃避光环境中反应20 min。
洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，加入洗涤工作液250 μL/孔，每次静置20 s，甩去孔内液体，重复洗涤3次，*后一次用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。
显色：加入底物液A液50 μL/孔，再加底物
液B液50 μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃避光环境中反应10 min。
测定：加入终止液50 μL/孔，用酶标仪立即 测定450 nm处的吸光度值（建议用双波长450/630 nm）检测。
七、 结果判定
以标准品百分吸光率为纵坐标，以黄曲霉毒素总量标准品浓度（ppb）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中黄曲霉毒素总量实际浓度。（详见试剂盒专业分析软件，以便进行大量样本的分析计算。）
八、 注意事项
① 洗板拍干后应立即进行下一步操作。
② 反应终止液为2 M硫酸，避免接触皮肤。
③ 不使用过了有效期的试剂盒，不交换使用不同批号的试剂。
④ 0标准的吸光度（450/630 nm）值小于0.5（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。
⑤ 在加入底物液A液和底物液B液后，一般显色时间为10～15 min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到20 min，反之则减短反应时间。
九、贮藏条件及保存期
贮藏条件： 2～8℃
保 质 期： 12个月 |
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