一、实验器材及试剂
1、实验器材
2、主要实验试剂
试剂 厂家 货号 稀释比
无水乙醇 国药集团化学试剂有限公司
二甲苯 国药集团化学试剂有限公司
EDTA（PH8.0)抗原修复液 谷歌生物 G1206
EDTA(PH9.0)抗原修复液 谷歌生物 G1203
柠檬酸（PH6.0)抗原修复液 谷歌生物 G1202
PBS缓冲液 谷歌生物 G0002
自发荧光淬灭剂 谷歌生物
BSA 谷歌生物 G5001
一抗
荧光二抗
DAPI 谷歌生物 G1012
抗荧光淬灭封片剂 谷歌生物 G1401
二、石蜡切片免疫荧光实验步骤
1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸馏水洗。
2、抗原修复：组织切片置于盛满EDTA抗原修复缓冲液（PH8.0）的修复盒中于微波炉内进行抗原修复。中火8min停火8min转中低火7min，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。(修复液和修复条件根据组织来确定）
3、画圈自发荧光淬灭：切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈（防止抗体流走），在圈内加入自发荧光淬灭剂5min，流水冲洗10min。
4、血清封闭:在圈内滴加BSA孵育30min。
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