一、实验器材及试剂
1、实验器材
名称 厂家 型号
脱水机 武汉俊杰电子有限公司 JJ-12J
包埋机 武汉俊杰电子有限公司 JB-P5
病理切片机 上海徕卡仪器有限公司 RM2016
冻台 武汉俊杰电子有限公司 JB-L5
组织摊片机 浙江省金华市科迪仪器设备有限公司 KD-P
烤箱 天津市莱玻瑞仪器设备有限公司 GFL-230
载玻片 Servicebio
正置光学显微镜 日本尼康 Nikon Eclipse E100
成像系统 日本尼康 Nikon DS-U3
2、主要实验试剂
试剂名称 厂家 货号
无水乙醇 国药集团化学试剂有限公司 100092683
二甲苯 国药集团化学试剂有限公司 10023418
masson染液套装 Servicebio G1006
分化液 servicebio G1005-3
返蓝液 servicebio G1005-4
中性树胶 国药集团化学试剂有限公司 10004160
二、实验步骤
1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min，自来水洗。
2、重铬酸钾染色：切片入重铬酸钾浸泡过夜，自来水洗。
3、铁苏木素染色：铁苏木素A液与B液等比混合成铁苏木素染液，切片入铁苏木素3min，自
来水洗，分化液分化，自来水洗，返蓝液返蓝，流水冲洗。
4、丽春红酸性品红染色：切片入丽春红酸性品红浸染5-10 min，自来水漂洗。
5、磷钼酸染色：磷钼酸水溶液浸染1-3 min。
6、苯胺蓝染色：磷钼酸之后不用水洗，直接入苯胺蓝染液染3-6min。
7、分化：切片用1%冰醋酸分化，两缸无水乙醇脱水。
8、透明封片：切片放入第三缸无水乙醇5min，二甲苯5min透明，中性树胶封片。
9、显微镜镜检，图像采集分析。
三、结果判读：
胶原纤维呈蓝色；肌纤维、纤维素和红细胞呈红色。
四、注意事项：
1、重铬酸钾染完后水洗要稍快，切片洗干净即可。
2、根据切片的数量对铁苏木素染液进行更换，也可以现配现用；
3、丽春红的染色程度要控制好，胶原部分不能是红色或者太红，会影响后续苯胺蓝的着色；
4、冰醋酸分化苯胺蓝的过程中，若是分化过度，胶原蓝色太浅，若分化不足，易与丽春红的颜色叠加呈紫蓝色。 |
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