一、原理
本试剂盒采用固相酶联免疫吸附ELISA原理，通过黄曲霉毒素B1(AFB1)抗原和曲霉毒素B1(AFB1)抗体，待测抗原的竞争免疫反应，以及酶的催化显色反应来检测AFB1，优点是灵敏度高，特异性好，操作简便，结果易判读，适用于食品、饲料及相关原料中AFB1的定量检测。
二、试剂盒技术指标
试剂盒灵敏度：0.1 ppb
回收率： 谷物/饲料中AFB1回收率 95%±15%
变异系数：批内变异系数<10%，批间变异系数<15%。
三、试 剂 盒 组 成
1．微量测试孔： 96T/8孔
2．标 准 液×6瓶：（1 mL/瓶） 0 ppb 0.05 ppb 0.15 ppb 0.45 ppb 1.35 ppb 4.05 ppb
3．抗体工作液 7 mL
3．酶标记物 12 mL
4．底物缓冲液 7 mL
5．底物液 7 mL
6．终止液 7 mL
7．20倍浓缩洗涤液 50 mL 加蒸馏水后稀释到1000 mL。
四、样本前处理步骤
实验准备：配制60 %甲醇水溶液（v/v，60：40）和20 %甲醇水溶液（v/v，20：80）。
注意：请精确配制上述溶液，以免影响检测的准确性。
1 . 脂肪含量低的固体样品（如大米、玉米、小麦和饲料等）
1、称取5 g 粉碎样品于100 mL带塞三角瓶内，准确加入25 mL 60%甲醇水溶液。
2、将加入了甲醇水溶液的样品放入振荡器内（或用手强力振荡），充分振荡3 min后，用滤纸过滤，收集滤液。
3、取滤液2 mL，加入6 mL 20 %甲醇水溶液，混匀，用whatman 1号滤纸过滤，此为样品待检液。
2．酱油、醋
1、称取5 g样品于25 mL小烧杯中，用10 mL蒸馏水将试样转移到125 mL分液漏斗中，加入25 mL三氯甲烷，加塞轻轻振摇3 min，静置分层。
2、放出下层三氯甲烷层，取5 mL于20 mL蒸发皿中，65 ℃水浴通风挥干。挥干冷却后，准确加入5 mL 60%甲醇水溶液，将蒸发皿中的凝结物充分溶解。
3、取溶解液2 mL，加入6 mL 20%甲醇水溶液，混匀，此为样品待检液。
3．食用油（如菜油、麻油、色拉油、花生油等）
1、称5 g油样于25 mL小烧杯中，用20 mL石油醚或正乙烷分次将试样转移至125 mL分液漏斗中，准确加入25 mL 60%甲醇水溶液溶液，加塞轻轻振摇5 min，静置分层，放出下层60%甲醇水提取液。
2、取提取液2 mL，再加入6 mL 20%甲醇水溶液，混匀，此为样品待检液。
4．酒类
1、称取5 g样品于125 mL分液漏斗中，加入25 mL三氯甲烷，加塞轻轻振摇3 min，静置分层。
2、放出下层三氯甲烷层，取5 mL于20 mL蒸发皿中，65 ℃水浴通风挥干。挥干冷却后，准确加入5 mL 60%甲醇水溶液，将蒸发皿中的凝结物充分溶解。
3、取溶解液2 mL，再加入6 mL 20%甲醇水溶液，混匀，此为样品待检液。
5．花生
1、样品去壳粉碎，称取5 g于100 mL具塞三角瓶中。加入25 mL 60%甲醇水溶液和20 mL正乙烷（或石油醚），振摇10 min，用whatman 1号滤纸过滤。
2、收集滤液于125 mL分液漏斗中，静置分层后放出下层60%甲醇水提取液。
3、取提取液2 mL，再加入6 mL 20%甲醇水溶液，混匀，再用whatman 1号滤纸过滤，此为样品待检液。
6．月饼、桃酥、花生酱等
1、称取5 g粉碎样品于125 mL具塞三角瓶中，准确加入25 mL 60%甲醇水溶液和20 mL正乙烷（或石油醚）加塞震荡10 min，过滤，收集滤液于分液漏斗中，静置分层。
2、待下层甲醇水溶液澄清后，放出甲醇水溶液于另一三角瓶中。吸取10 mL甲醇水提取液于125 mL分液漏斗中，加入20 mL三氯甲烷，加塞轻轻振摇3 min，静置分层。放出下层三氯甲烷层，取10 mL于20 mL蒸发皿中，65 ℃水浴通风挥干。挥干冷却后，准确加入5 mL 60%甲醇水溶液，将蒸发皿中的凝结物充分溶解。
3、取溶解液2 mL，再加入6 mL 20%甲醇水溶液，混匀，此为样品待检液。
7．面粉、饲料浓缩料
1、称取5 g样品于125 mL具塞三角瓶中，准确加入25 mL 60%甲醇水溶液加塞震荡10 min，过滤，收集滤液。
2、吸取10 mL滤液于125 mL分液漏斗中，加入20 mL三氯甲烷，加塞振摇3 min，静置分层。放出下层三氯甲烷层，取10 mL于20 mL蒸发皿中，65 ℃水浴通风挥干。挥干冷却后，准确加入5 mL 60%甲醇水溶液，将蒸发皿中的凝结物充分溶解。
3、取溶解液2 mL，再加入6 mL 20%甲醇水溶液，混匀，此为样品待检液。 |
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