美国abraxis氟喹喏酮检测试剂盒
概述
氟喹诺酮检测试剂盒适用于检测氟喹诺酮的含量。这个检测适用于定量或定性检测水样或鱼虾产品。其他样品的提取步骤请与我公司联系。如果有必要可以通过HPLC, GC/MS或其他的传统方法证实测定结果。
储存和稳定性
氟喹诺酮检测试剂盒应该保存在4–8°C。在使用之前试剂盒中的试剂要恢复到室温。试剂盒在有效期内可以使用。结合物以低压冻干的形式保存（3瓶）。在检测前要用结合物稀释液配制一定量低压冻干形式保存的结合物。因为配制好的溶液仅能保存1周所以需要多少就配制多少。
原理
Abraxis氟喹诺酮检测试剂盒的原理是直接竞争酶联免疫反应。通过特异性抗体来识别氟喹诺酮。样品中氟喹诺酮和氟喹诺酮-HRP酶结合物竞争与溶液中兔抗氟喹诺酮抗体结合位点结合。这氟喹诺酮抗体与固定在微孔板上的二抗结合。洗板，加入底物显色剂发生显色反应；样品中的氟喹诺酮浓度与显现出的蓝色的深度成反比。加入反应终止液终止反应。在450nm波长进行检测，通过做标准曲线计算每个样品中氟喹诺酮的含量。
A 试剂盒组成
1、96孔酶标板：包被有羊抗兔二抗，1块（12条×8孔）。
2、氟喹诺酮标准品:7瓶，浓度分别为0, 0.025, 0.05, 0.125, 0.25, 0.5, 和1.0 ng/mL
3、氟喹诺酮HRP酶标记物（结合物）：3瓶（低压冻干保存），溶解后每瓶3ml
4、结合物稀释液12 mL：用于稀释氟喹诺酮HRP酶标记物
5、兔抗氟喹诺酮抗体：1瓶（6ml）
6、样品稀释液25ml，用于稀释样品。
7、5×浓缩洗液：1瓶（100ml）
8、底物显色液（TMB）：1瓶（12ml）
9、终止液：1瓶（12ml）。
检测步骤
使用前将试剂盒和样品处理物提前从冰箱中拿出来使其达到室温。从铝箔袋中拿出要求数量的微孔条，放入干燥剂并重新封好袋子以免微孔条受潮。
1、在对应的微孔中加入50μL标准和样品（或样品提取液）。推荐做2-3个平行。
2、用多道移液器在每个测试孔都加入50 μL重新稀释的氟喹诺酮HRP酶标记物（结合物）。
3、用多道移液器在每个测试孔都加入50 μL兔抗氟喹诺酮抗体溶液，用胶带盖上，通过移动酶标板来混合液体。
4、在室温下孵育60分钟
5、孵育完成后，将微孔中的溶液倒入水槽中，用1X 洗液加满微孔然后倒掉，拍板，去掉残留的洗液，重复三次，总共四次洗板。
6、每个测试孔加入100μL底物显色液。通过移动酶标板来混合液体，混合30秒。在室温下孵育20-30min，避免阳光直射。
7、每个测试孔加入100μL终止液。
8、在加入终止液15分钟内，450nm 下读取每个孔的吸光度值（OD）。
结果分析
可以利用商业ELISA软件程序比如Logit/Log or 4-Parameter 来评价ELISA结果。也可以通过计算每个标准的%B/B0值，以%B/B0为y轴、氟喹诺酮浓度为x轴作一标准曲线。样品浓度可以通过标准曲线来计算。当样品中氟喹诺酮的浓度大于1ng/ml时要稀释后再测定。 |
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